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WB样品为何如“鼻涕”?尊龙凯时教你一招清除核酸残团,条带立刻清晰!

发布时间:2025-08-08   信息来源:尊龙凯时官方编辑

在进行Western Blot(WB)实验时,最令人头痛的就是“鼻涕状”样品。这种样品不仅吸取困难,定量不准,还会导致电泳分离不理想,甚至可能完全没有条带。造成这种情况的主要原因是基因组DNA与蛋白质混合后形成的“核酸残团”。这种残团会带来一系列问题:阻塞移液器、无法单独分离上清液、胶孔拒载、条带拖尾及蛋白质丢失。

WB样品为何如“鼻涕”?尊龙凯时教你一招清除核酸残团,条带立刻清晰!

当裂解液加入样品后,细胞被裂解,DNA链解链形成长链状,类似“章鱼触手”的核酸残团缠绕住蛋白质和细胞碎片,使样品变得异常粘稠。这不仅将样品的性质改变为如胶水般的状态,还使大量蛋白质难以释放,导致WB结果的失真。

研究者Li利用不同的方法提取小鼠脾脏和肝脏的蛋白,分析提取得到的蛋白质图谱,并评估RIPA提取后的核酸残团影响。基于不同提取方法,结果显示,尽管核酸残团与可溶组分的蛋白谱相似,但其间仍有许多不可溶成分的蛋白质条带被遗漏。这种蛋白质的随机丢失不仅影响了整体蛋白质图谱,还改变了不同蛋白质的比例,无法真实反映样品中蛋白质的表达情况。

想要获得真实可靠的WB结果,必须在样品制备过程中去除这些粘稠的核酸残团。尽管超声波能够破坏蛋白复合物,改善样品的粘稠度,但也会带来剧烈起泡、热降解、交叉污染和样品损耗等问题。而核酸酶虽能降解核酸,但在复杂的裂解液中效果有限,且受到多种因素抑制,实际应用效果不佳。

因此,尊龙凯时推出的新一代柱式蛋白提取工具,成为解决这一难题的利器。实测对比显示,使用RIPA强裂解液提取的小鼠脾脏组织与利用尊龙凯时柱式法提取的样品之间,结果截然不同。前者在SDS-PAGE后出现了明显的胶孔滞留和条带缺失,而后者的胶孔干净,条带清晰,连低丰度的蛋白质也全部在线。

样品的“鼻涕”状并非绝境,而是一个警示:别轻视核酸残团的影响。切换到尊龙凯时的柱式法,从源头上消除这些障碍,WB的成功率将会大幅提升!