尊龙凯时细胞培养条件包括：气相成分为95%空气和5%二氧化碳，培养温度设定为37℃。首次传代时建议采用1:2的比例。传代后的培养情况需在2天内更换培养液。此外，建议一次性购买尊龙凯时的产品，以享受价格优惠。收到细胞后，应将其处理至良好状态后，灌满完全培养液并密封瓶口，这是运输细胞的最佳方式。

对收到的细胞，需使用75%的酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，然后在超净工作台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3至4小时，以稳定细胞状态后再进行后续处理。显微镜下观察细胞生长情况，并对不同倍数下的细胞进行拍照保存（建议40x、100x和200x各一张），前三天的照片将作为重要的售后依据，若不提供照片则默认细胞状态良好。

细胞培养步骤

尊龙凯时细胞培养的详细步骤如下：

a. 细胞传代

在细胞汇合度未超过80%时，将瓶装的完全培养液收集至离心管，保留5ml放入37℃、5% CO2孵箱中培养；若细胞密度超过80%，即可进行传代。针对贴壁细胞的传代步骤如下：

• 首先弃去培养上清，使用无钙、无镁PBS润洗细胞1到2次；
• 接着加入0.25%的胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，并放入37℃培养箱中消化1到2分钟，观察细胞的消化情况；
• 如大多数细胞变圆并脱落，迅速取回操作台，轻敲培养瓶后添加5ml完全培养基终止消化；
• 轻轻吹打细胞以确保完全脱落，然后吸出，并将悬液转移至15ml的离心管中，1000RPM离心5分钟；
• 弃去上清，加入1-2ml完全培养基重悬；
• 最后将细胞悬液按1:2的比例进行分瓶传代（分成两个T25瓶），并补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

B. 细胞冻存

在细胞生长至覆盖培养瓶的80%时，弃去T25培养瓶中的培养液，并用PBS清洗一次；再加入0.25%的胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化；轻轻吹打使细胞脱落后，转移到15ml离心管中，1000RPM离心5分钟；

弃去上清，加入1ml尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管中。将冻存细胞直接放入-80℃冰箱即可，若后续需转入液氮罐，需在-80℃冰箱中存放24小时以上再转入液氮罐。

C. 细胞复苏

从液氮中取出细胞冻存管时请佩戴防护面具，迅速放入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭管外壁。将细胞移至15ml离心管中，含5ml完全培养基后，1000RPM离心5分钟；

弃去上清后，用5ml完全培养基重悬，并接种至T25培养瓶，置于37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。第二天更换为新鲜的完全培养基继续培养。

注意事项

在运输过程中，有些细胞可能会脱落，这是正常现象。如脱离较多，可将瓶中所有培养液收集至离心管中，1000RPM离心5分钟，收集上清作过渡培养。之后，沉淀细胞并加入1-2ml胰酶，轻轻吹打后重悬消化1到2分钟，再加入5ml完全培养基终止消化。再次离心后，弃去上清，重悬后按1:2比例进行分瓶传代，将新的完全培养基补充至5-8ml/瓶，最终放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。